免疫組化輔助試劑包（抗兔/小鼠igg）
使用說(shuō)明書(shū)
僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!
第1版（2016年04月修訂）
[產(chǎn)品信息]
通過(guò)辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記抗兔/小鼠抗體與結(jié)合在組織片上的一抗（來(lái)源于兔或小鼠）特異性結(jié)合形成免疫復(fù)合物。位于聚合物上HRP會(huì)催化底物H2O2與DAB反應(yīng)，最終形成棕褐色不溶性色原，特異性的將免疫原在組織和細(xì)胞中標(biāo)定出來(lái)，通過(guò)顯微鏡觀察確定免疫原的最終位點(diǎn)。
[試劑組分]
| 編號(hào) | 成分 | 包裝規(guī)格 | ||||
| 1 | 內(nèi)源性過(guò)氧化物酶阻斷劑工作液 | 3mL | 6mL | 18mL | 55mL | 110mL |
| 2 | HRP標(biāo)記抗兔/小鼠IgG聚合物 | 3mL | 6mL | 18mL | 55mL | 110mL |
| 3 | 封閉血清工作液 | 3mL | 6mL | 18mL | 55mL | 110mL |
| 4 | 蘇木素染液 | 3mL | 6mL | 18mL | 55mL | 110mL |
| 5 | 枸櫞酸鈉抗原修復(fù)液(20×) | 10mL | 20mL | 60mL | 200mL | 400mL |
| 6 | 顯色劑 (1×) | 3mL | 6mL | 18mL | 55mL | 110mL |
| 7 | DAB顯色液 (50×) | 60μL | 120μL | 360μL | 1.1mL | 2.2mL |
[適用范圍]
本產(chǎn)品僅用于免疫組化實(shí)驗(yàn)，適用于手工和機(jī)器大批量操作。本試劑僅對(duì)10%中性緩沖福爾馬林固定石蠟包埋的組織進(jìn)行了驗(yàn)證，不作其他用途。
[儲(chǔ)存及有效期]
2～8℃避光保存，不得凍存；產(chǎn)品有效期為6個(gè)月。
[實(shí)驗(yàn)操作]
1、完成IHC實(shí)驗(yàn)還要的設(shè)備和試劑
a)、移液器、恒溫箱、修復(fù)儀、免疫組化筆、計(jì)時(shí)器、孵育盒、染色架、蓋玻片、光學(xué)顯微鏡、洗瓶。
b)、DAB顯色液工作液：利用顯色劑稀釋DAB顯色液到工作液濃度，現(xiàn)配現(xiàn)用。
c)、枸櫞酸鈉抗原修復(fù)液工作液（pH 6.0，0.01M）：利用雙蒸水稀釋枸櫞酸鈉抗原修復(fù)液（20×）到工作液濃度使用。
2、實(shí)驗(yàn)步驟
（1）烘片：鉛筆標(biāo)記用于區(qū)分石蠟切片，65℃，1-2小時(shí)。
（2）脫蠟至水：烘片結(jié)束，石蠟切片依次于二甲苯I 30分鐘，二甲苯II 30分鐘，100%、100%、95%、80%、70%的乙醇中各10分鐘，再放入純水里10分鐘。
（3）抗原修復(fù)。
微波法：取一定量枸櫞酸鈉抗原修復(fù)液工作液，加入微波盒中，微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫 塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，微波低火處理3分鐘，放置8分鐘后低火3分鐘，取出微波盒流水自然泠卻，從 緩沖液中取出玻片，先用蒸餾水沖洗兩次，之后用PBS沖洗3分鐘×3次。
（4）阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。加入適量的內(nèi)源性過(guò)氧化物酶阻斷劑工作液，室溫孵育10分鐘；PBS緩沖液沖洗3分鐘×3次。
（5）非特異性位點(diǎn)的封閉：甩去殘夜，滴加封閉血清工作液覆蓋切片，約100-200μL/片，室溫孵育20分鐘。
（6）根據(jù)組織大小，滴加100-200μL或適量的一抗（來(lái)自兔/小鼠），37℃孵育60分鐘；PBS緩沖液沖洗3分鐘×3次。
（7）滴加100-200μL或適量的HRP標(biāo)記抗兔/小鼠IgG聚合物，37℃孵育30分鐘；PBS緩沖液沖洗3分鐘×3次。
（8）顯色。加入適量新鮮配制的DAB顯色液工作液，室溫孵育30秒-10分鐘，根據(jù)顯微鏡下著色情況終止反應(yīng)。
（9）復(fù)染。自來(lái)水沖洗，蘇木素染液孵育0.5-2分鐘；滴加1%鹽酸酒精分色3秒、PBS浸泡返藍(lán)。
（10）脫水、透明、封片。
（11）顯微鏡觀察，拍照。
[注意事項(xiàng)]
1、在每一次染色過(guò)程中，必須有空白對(duì)照和陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行。
2、如果陽(yáng)性組織對(duì)照不能顯示適當(dāng)?shù)年?yáng)性染色，應(yīng)判定該批次樣本的檢測(cè)結(jié)果無(wú)效。
3、若HRP標(biāo)記IgG聚合物孵育溫度過(guò)高或孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，可能導(dǎo)致染色過(guò)強(qiáng)及背景染色。
4、紅細(xì)胞和細(xì)胞色素 C可能會(huì)造成假陽(yáng)性結(jié)果。
5、脫蠟不徹底，容易影響染色效果，建議免疫組化切片脫蠟與常規(guī)HE脫蠟分開(kāi)。
6、為防止可能出現(xiàn)的假陽(yáng)性、假陰性結(jié)果，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需設(shè)置陽(yáng)性與陰性對(duì)照。
7、實(shí)驗(yàn)中滴加試劑時(shí)，過(guò)多的PBS緩沖液會(huì)導(dǎo)致試劑被稀釋，將引起染色強(qiáng)度變?nèi)酰虼?，滴加試劑前?yīng)除去多余的緩沖液。
8、在實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中，請(qǐng)穿戴好手套、眼鏡和實(shí)驗(yàn)服，以及依照相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)流程，做好防護(hù)措施。
